抗萬古霉素腸球菌(VRE)顯色培養(yǎng)基使用說明書
法國科瑪嘉VRE顯色培養(yǎng)基
用于耐萬古霉素糞腸球菌(E.faecalis)和尿腸球菌(E.faecium)的鑒定和計(jì)數(shù)。
【組分】
瓊脂 15.0g/L
蛋白胨和酵母浸出物 20.0 g/L
色素 27.3 g/L
鹽類 5.0 g/L
PH 6.8±0.2
根據(jù)需要,可以進(jìn)行經(jīng)典配方的調(diào)整或補(bǔ)充。
【操作】
- 稱取瓶內(nèi)干粉67.3g,用1000ml蒸餾水或純水溶解,可以按照67.3 g/L的比例擴(kuò)大或 縮小。
- 將上述干粉緩慢倒入蒸餾水中,充分?jǐn)嚢柚敝镰傊?溶解。
- 加熱至100℃,并且不斷攪拌。如果使用高壓鍋,請(qǐng)不要加壓,加熱不能超過100℃。使用微波爐加熱時(shí),在煮沸后立即移出微波爐并不斷攪拌,而后移入微波爐再加熱,直至*溶解(大氣泡代替泡沫產(chǎn)生,大約需要2分鐘)。
- 把VRE基礎(chǔ)培養(yǎng)基冷卻至45-50℃?zhèn)溆茫嘶A(chǔ)培養(yǎng)基為乳白色。
- 取增補(bǔ)劑一瓶,加入1ml 54%酒精溶解,以無菌操作把增補(bǔ)劑加入到備用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,輕輕混合均勻(使其終濃度為60mg/L),避免氣泡,也可按照60mg/L的比例擴(kuò)大或縮小 。
- 使用傾注程序:準(zhǔn)備直徑為90mm的已滅菌的帶蓋培養(yǎng)皿,每個(gè)培養(yǎng)基接種1ml樣品,然后傾注混合均勻的培養(yǎng)基 15±1ml,混合均勻使其凝固,倒置,37℃培養(yǎng)16小時(shí) ,24小時(shí) 和48小時(shí),觀察結(jié)果 。
- 如果使用表面接種程序:將培養(yǎng)基傾注于已滅菌的培養(yǎng)皿中(用前貯存于2-8℃,避光,接種前應(yīng)先恢復(fù)至室溫)。樣品劃線接種或者涂布接種于 培養(yǎng)基表面,在37℃培養(yǎng)18小時(shí),24小時(shí)和48小時(shí),觀察結(jié)果。
【貯存】
1、法國科瑪嘉VRE顯色培養(yǎng)基干粉需保存在15-30℃干燥環(huán)境中,增補(bǔ)劑保存于2-8℃環(huán)境下。
2、傾注好的培養(yǎng)基在室溫可保存一天,2-8℃冰箱中避光可以貯存兩星期。
【結(jié)果】
微生物 | 菌落顏色 |
VRE糞腸球菌 、尿腸球菌 VRE雞腸球菌、鉛黃腸球菌 其他革蘭氏陽性細(xì)菌 革蘭氏陰性菌 | 玫瑰色至紫色 藍(lán)色或被抑制 被抑制 被抑制 |
★ 極少數(shù)其他菌屬菌株如乳酸桿菌素可能呈現(xiàn)很小的紫色菌落。
★ 使用過的培養(yǎng)基需要在121℃滅菌至少20分鐘才可以按照有關(guān)規(guī)定丟棄。